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高效液相出峰异常解决方法
文章来源:新蓝景国际化学在线      发布日期:2015/9/29 11:20:33      浏览次数:

一、保留时间变化
可能的原因 : 解 决 方 法

1. 柱温变化 : 柱恒温

2. 等度与梯度间未能充分平衡 : 至少用10倍柱体积的流动相平衡柱

3. 缓冲液容量不够 : 用>25mmol/L的缓冲液

4. 色谱柱污染 : 每天冲洗柱

5. 柱内条件变化 : 稳定进样条件,调节流动相

6. 色谱柱快达到寿命 : 采用保护柱

二、保留时间缩短

可能的原因 : 解 决 方 法

1. 流速增加 : 检查泵,重新设定流速

2. 样品超载 : 降低样品量

3. 键合相流失 : 流动相PH值保持在3~7.5,检查柱的方向

4. 流动相组成变化 : 防止流动相蒸发或沉淀

5. 温度增加 : 柱恒温

三、保留时间延长

可能的原因 : 解 决 方 法

1. 流速下降 : 管路泄漏,更换泵密封圈,排除泵内气泡

2. 硅胶柱上活性点变化 : 用流动相改性剂,如加三乙胺,或采用碱钝化柱

3. 键合相流失 : 流动相PH值保持在3~7.5检查柱的方向

4. 流动相组成变化 : 防止流动相蒸发或沉淀

5. 温度降低 : 柱恒温

四、出现肩峰或分叉

可能的原因 : 解 决 方 法

1. 样品体积过大 : 用流动相配样,总的样品体积小于第一峰的15%

2. 样品溶剂过强 : 采用较弱的样品溶剂

3. 柱塌陷或形成短路通道 : 更换色谱柱,采用较弱腐蚀性条件

4. 柱内烧结不锈钢失效 : 更换烧结不锈钢,加在线过滤器,过滤样品

5. 进样器损坏 : 更换进样器转子

五、鬼峰

可能的原因 : 解 决 方 法

1. 进样阀残余峰 : 每次用后用强溶剂清洗阀,改进阀和样品的清洗

2. 样品中未知物 : 处理样品

3. 柱未平衡 : 重新平衡柱,用流动相作样品溶剂 (尤其是离子对色谱)

4. 三氟乙酸(TFA)氧化(肽谱) : 每天新配,用抗氧化剂

5. 水污染(反相) : 通过变化平衡时间检查水质量,用HPLC级的水

六、基线噪声
可能的原因 : 解 决 方 法

1. 气泡(尖锐峰) : 流动相脱气,加柱后背压

2. 污染(随机噪声) : 清洗柱,净化样品,用HPLC级试剂

3. 检测器灯连续噪声 : 更换氘灯

4. 电干扰(偶然噪声) : 采用稳压电源,检查干扰的来源(如水浴等)

5. 检测器中有气泡 : 流动相脱气,加柱后背压

七、峰拖尾

可能的原因 : 解 决 方 法

1. 柱超载 : 降低样品量,增加柱直径采用较高容量的固定相

2. 峰干扰 : 清洁样品,调整流动相

3. 硅羟基作用:加三乙胺,用碱致钝化柱增加缓冲液或盐的浓度降低流动相PH值,钝化样品

4. 柱内烧结不锈钢失效 : 更换烧结不锈钢,加在线过滤器,过滤样品

5. 柱塌陷或形成短路通道 : 更换色谱柱,采用较弱腐蚀性条件

6. 死体积或柱外体积过大 : 连接点降至最低,对所有连接点作合适调整,尽可能采用细内径的连接管

7. 柱效下降 : 用较低腐蚀条件,更换柱,采用保护柱

八、峰展宽

可能的原因 : 解 决 方 法

1. 进样体积过大 : 用流动相配样,总的样品体积小于第一峰的15%

2. 在进样阀中造成峰扩展 : 进样前后排出气泡以降低扩散

3. 数据系统采样速率太慢 : 设定速率应是每峰大于10点

4. 检测器时间常数过大 : 设定时间常数为感兴趣第一峰半宽的10%

5. 流动相粘度过高 : 增加柱温,采用低粘度流动相

6. 检测池体积过大 : 用小体积池,卸下热交换器

7. 保留时间过长 : 等度洗脱时增加溶剂含量也可用梯度洗脱

8. 色谱柱外体积过大 : 将连接管径和连接管长度降至最小

9. 样品过载 : 进小浓度小体积样品